Formulasi fiksasi histologi kerang

Terdapat berbagai jenis larutan fiksatif yang dapat digunakan untuk mengawetkan kerang untuk tujuan pembuatan sediaan histologi. Larutan fiksatif yang digunakan umumnya harus memiliki kemampuan mengawetkan, mencegah perubahan postmortem seminimal mungkin.

OIE menyarankan penggunaan larutan Davidson’s untuk pengamatan patologi pada kelompok moluska. Formalin 10%  dan Carson serta larutan lainnya juga dapat digunakan. Apabila setelah histologi akan dilakukan metode ISH, fiksasi tidak boleh lebih dari 48 jam agar asam asetat dari larutan Davidson’s tidak merusak DNA.

Jenis larutan fiksasi untuk kerang:

1. Larutan Davidson’s

Larutan ini  paling direkomendasikan untuk memfiksasi moluska. 

Stock solution

Air laut terfilter              1200ml

Etanol 95%                     1200ml

Formaldehyde 36-40%   800ml

Gliserin                             400ml

Working solution

9 bagian larutan Davidson’s : 1 bagian asam asetat glacial

2. Larutan Carson’s

Direkomendasikan untuk moluska berukuran besar

Sodium dyhidrogenophosphate           23,8gr

Sodium hydroxide                                     5,2gr

Formaldehyde 36-40%                           100ml

Dilarutkan dalam akuades                    900ml

3.Formalin-calcium 15%

Formaldehyde 36-40%                                                           150ml

Calcium chloride (anhydrous, granular, technical grade) 850ml

4. 1G4F solution (1% glutaraldehyde: 4% formaldehyde)

buffer formalin 37-40% 120ml**

glutaraldehyde 50%         20ml

tap water                         360ml

** buffer formalin

37-40% formaldehyde                      1Liter

disodium phosphate (Na2HPO4)   15gr

sodium hydroxide (NaOH)            0,06gr

phenol red (pH indicator)             0,03gr

5. Buffer formalin 10% dalam air laut yang difilter

37-40% formaldehyde         10ml

Air laut yang difilter             90ml

 

Referensi

Bondad-Reantaso, M.G., McGladdery, S.E., East, I., and Subasinghe, R.P. (eds.) Asia Diagnostic Guide to Aquatic Animal Diseases. FAO Fisheries Technical Paper No. 402, Supplement 2. Rome, FAO. 2001. 240 p

Howard, D.W., E.J. Lewis, B.J. Kelelt & C.S. Smith. 2004. Histological Techniques for Marine Bivalve Molluscs and crustaceans. NOAA Technical Memorandum NOS NCCOS 5, 218 hal

Ifremer. 2011. Molluscs processing for diagnostic by histology. European Union Refrence Labooratory for Molluscs Disease. 

Kim, Y., K.A. Ashton-Alcox, and E.N. Powell. 2006. Histological Techniques for Marine Bivalve Molluscs: Update. Silver Spring, MD. NOAA Technical Memorandum NOS NCCOS 27. 76hal