Prosedur Pembuatan apus darah pada ikan

Preparat ulas/apus darah dibuat segera setelah dilakukan pengambilan darah guna menghindari penurunan kualitas sel. Tujuan pembuatan preparat apus darah adalah untuk menghitung jumlah leukosit dan trombosit, mengamati morfologi eritrosit, atau lebih jauh lagi adalah menghitung indeks fagositik. Prinsip dasar pembuatan preparat adalah melakukan ulas dengan setetes darah sepanjang objek gelas. Hasil ulasan kemudian diwarnai menggunakan pewarna tipe Romanowsky yang mengandung azure A, azure B, metil blue, metil violet (e.g., Wright’s stain, Giemsa stain, atau rapid stains sepertis Diff-Quik atau Accustain)

Alat dan bahan

• Darah
• Aquades
• PBS
• Stain (HE, giemsa, wright giemsa, dll)
• methanol
• Objek glass
• Cover glass
• pipet Pasteur       

Prosedur

Pembuatan preparat apus darah

• Teteskan darah pada salahs atu ujung objek glass 1
• Letakkan objek glass 2, disentuhkan pada tetesan darah di objek glass 1
• Biarkan darah mengalir ke sisi kiri dan kanan objek glass
• Lakukan dorongan/ tarikan objek glass ke bagian depan sehingga terbentuk lapisan film darah pada objek glass 1
• Kering anginkan
• Fiksasi menggunakan methanol hingga kering angin
• 
  
• Pewarnaan
• Bila menggunakan giemsa 10% (9 bagian aquades/PBS: 1 bagian giemsa stock) diamkan selama 30-60 menit, bilas dengan air mengalir/aquades, kering anginkan
• Amati dengan mikroskop

Pembuatan ulas darah (pict credit to https://ahdc.vet.cornell.edu)

Parameter yang diamati

-          Differensial leukosit

-          Trombosit

-          Indeks fagositik

Notes:

darah ikan sangat fragile. Untuk meminimalisir jumlah sel yang lisis dapat digunakan 22% bovine albumin. Campurkan 1 tetes bovine albumin ke dalam 5 tetes darah. Campurkan dengan menggojok atau menggunakan sentrifus. Setelah homogen darah dapat digunakan untuk ulasan darah.

Referensi

Ballard, B. dan Cheek, R (Ed). 2017. Exotic Animal Medicine for the Veterinary Technician Third Edition. John Wiley Publishers: India

Tully, T.L. dan Mitchell, M.A. A Veterinary Technician’s Guide to Exotic Animals Care 2^nd Edition. AAHA Press

Tusihadi, T., Kurniastuty, Dewi, J. 2007. Preparasi dan Pengelolaan Sampel dalam Pemeriksaan Penyakit dalam Balai Besar Pengembangan Budidaya Laut Lampung. 2007. Petunjuk Teknis Pengambilan Sampel. Seri Budidaya Laut no 15