Metode pengamatan secara mikroskopis hemolim pada udang

Alat dan bahan:

• Mikroskop dengan perbesaran 10-100x
• Objek glass
• Cover glass
• Air laut atau NaCl 0,9%
• Pipet Pasteur
• Alat bedah
• Syringe 1ml
• Antikoagulan (alsever, 10% sodium citrate, EDTA cair)
• Methanol
• Pewarna (giemsa, MGGW, dll)

Prosedur

a. Hemocyte count/ Total Hemosit

• Siapkan syringe yang telah diberi antikoagulan
• Ambil hemolim dari sinus ventral, jantung menggunakan syringe yang berisi antikoagulan
• Ambil hemolim, tempatkan panda hemositometer, lakukan perhitungan
• Total Hemosit yang diperoleh dalam satuan per mm3 of hemolim. Rata-rata jumlah Hemosit normal panda udang pre adult adalah 25,000 dan 35,000. 

b. Clotting time

• Ambil setetes hemolim pada objek glass, segera setelah  diambil dari udang
• Mulai menghitung waktu dan goyang slide perlahan
• Catat waktu ketika hemolim menjendal/mengental
• Clotting time normal pada udang adalah <30 detik. Jika lebih, ada indikasi stress atau terdapat infeksi

c. Bakteri dan parasit

• Ambil sampel hemolim, teteskan pada objek glass
• Encerkan dengan meneteskan air laut/ gunakan NaCl
• Amati adanya bakteri/ parasit yang motil
• Preparat dapat difiksasi lalu diwarnai dengan pengecatan gram, giemsa, atau pengecatan lainnya

 d. Diferensial Hemosit

• Ambil sampel hemolim, teteskan pada objek glass
• Buat ulasan dengan bantuan objek glass 2 dengan sudut 45o
• Preparat difiksasi dengan methanol kemudiandiwarnai dengan giemsa atau MGG, atau pengecatan lainnya
• Preparat diamati dengan mikroskop
• Lakukan perhitungan diferensial hemosit. Hemosit pada udang terbagi menjadi 3 jenis: hyaline, granular, semi granular. 

Catatan

Apabila diduga mengarah ke penyakit virus dan bakteri lakukan pemeriksaan dan penanganan sampel dengan metode yang sesuai. 

Referensi:

Kumar, A.R. 2022.. How to test shrimp blood clotting time? [Video]. YouTube. https://www.youtube.com/watch?v=L9N4yQbXERY

Lightner, D.V (Ed). 1996. A Handbook of Shrimp Pathology and Diagnostic Procedures For Diseases of Cultured Penaeid Shrimp. The World Aquaculture Society

Morales, V. y J. Cuéllar-Anjel (eds.).  2008.  Guía Técnica - Patología e Inmunología de Camarones Penaeidos.  Programa CYTED Red II-D Vannamei, Panamá, Rep. de Panamá. 270 pp.